Rho 8 Double Nickase Plasmid (h): sc-403363-NIC

RND3 kodiert Rho 8 (auch als RhoE bekannt), eine atypische GTPase der Rho-Familie, die die Organisation des Aktinzytoskeletts und die Zellkontraktilität moduliert, vor allem durch Antagonisierung der RHOA–ROCK-Signalgebung. Indem Rho 8 die Bildung von Stressfasern, die Dynamik fokaler Adhäsionen und die Phosphorylierung der Myosin-Leichtkette beeinflusst, trägt es zur Regulation der Zellmigration, des Neuritenauswuchses und des Zellzyklusfortschritts bei. Die RND3-Aktivität überschneidet sich mit Signalwegen, die Adhäsion und Überleben steuern, einschließlich der Reaktion auf Wachstumsfaktoren und zellulären Stress. Eine veränderte RND3-Expression oder -Signalgebung wurde mit Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Tumorzellinvasion, kardiovaskuläres Remodeling und neuroentwicklungsbezogene Prozesse relevant sind, was RND3 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur zytoskelettalen und transkriptionellen Regulation macht.

Rho 8 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RND3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RND3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RND3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RND3-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.