Rheb Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422675

Descripción general

Rheb de ratón codifica una pequeña GTPasa relacionada con Ras que actúa como activador central de mTORC1 en las membranas lisosomales, integrando la señalización de factores de crecimiento, la detección de aminoácidos y el estado energético celular para regular la síntesis de proteínas, la autofagia y el crecimiento celular. A través del complejo TSC1/TSC2, la actividad de Rheb está estrechamente controlada por la señalización PI3K–AKT y por entradas sensibles al estrés, modulando el metabolismo anabólico y la homeostasis mitocondrial. La señalización Rheb–mTORC1 desregulada se ha implicado en fenotipos del neurodesarrollo, biología tumoral y remodelación metabólica, lo que convierte a Rheb en un nodo ampliamente utilizado para diseccionar la señalización de nutrientes y el control del crecimiento. En sistemas murinos, la perturbación de Rheb sustenta estudios mecanísticos de programas de traducción dependientes de mTOR, señalización asociada al lisosoma y adaptación al estrés.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Rheb (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rheb en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rheb junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rheb tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Rheb.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rheb para la investigación de la señalización de Rheb, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Rheb críticos para la función de Rheb
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rheb para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Rheb CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Rheb CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rheb. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Rheb (m) y el plásmido HDR Rheb (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rheb para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rheb definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.