Plasmide CRISPR/Cas9 KO RGS17 (m): sc-425225

Présentation

Rgs17 code le régulateur de la signalisation des protéines G 17 (RGS17), un membre de la famille RGS qui accélère l’hydrolyse du GTP sur les sous-unités Gα afin de mettre fin à la signalisation déclenchée par les GPCR. En atténuant l’activité des protéines G hétérotrimériques, RGS17 influence la signalisation cAMP/PKA, les cascades de kinases en aval et des programmes transcriptionnels associés à la communication neuronale et aux réponses des cellules sécrétoires. Dans des systèmes murins, une expression modifiée de Rgs17 a été associée à des changements de phénotypes neurocomportementaux ainsi qu’à des réseaux de signalisation dérégulés, couramment étudiés dans des modèles de biologie tumorale et de métastase. Ces caractéristiques font de RGS17 un nœud utile pour étudier l’amplitude des signaux GPCR, le « cross-talk » entre voies et des sorties transcriptionnelles dépendantes du contexte.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RGS17 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Rgs17 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Rgs17, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Rgs17 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RGS17.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Rgs17 pour l'étude de la signalisation de RGS17, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Rgs17 essentiels à la fonction de RGS17
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Rgs17 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RGS17 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le RGS17 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Rgs17. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RGS17 plasmide HDR (m) et le RGS17 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Rgs17 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Rgs17 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.