Plasmide Double Nickase (m) RGMa: sc-434035-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) RGMa correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide RGMa Double Nickase (m) et le plasmide RGMa Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Rgma. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) RGMa | sc-434035-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) RGMa | sc-434035-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin Rgma code la « repulsive guidance molecule A » (RGMa), une protéine membranaire ancrée par glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui agit comme signal de guidage axonal et modulateur de la dynamique du cône de croissance neuronal. RGMa se lie à des récepteurs tels que la néogénine et influence une signalisation en aval qui recoupe le remodelage du cytosquelette, l’inhibition de la croissance des neurites et les programmes de connectivité neuronale. Elle participe également à la modulation de la voie BMP et peut façonner des réponses cellulaires pertinentes pour le développement, la régénération et les interactions immuno‑neurales. Une dérégulation de la signalisation de RGMa a été associée à des contextes neuro‑inflammatoires et neurodégénératifs, faisant de Rgma une cible utile pour des études mécanistiques de la formation des circuits et des réponses aux lésions dans le système nerveux de la souris.
RGMa Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Rgma dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Rgma. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Rgma. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Rgma.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.