Plasmide CRISPR/Cas9 KO RFX2 (h): sc-406040

Présentation

RFX2 (regulatory factor X2) est un facteur de transcription à domaine « winged-helix » qui se fixe sur des motifs X-box et coordonne des programmes d’expression génique nécessaires à la ciliogenèse et au fonctionnement des cils motiles. Dans les cellules humaines, RFX2 régule des réseaux contrôlant l’ancrage du corps basal, l’assemblage de l’axonème et le transport intraflagellaire, ce qui le relie au couplage cycle cellulaire–cil et à la différenciation épithéliale. La dérégulation des circuits transcriptionnels de la famille RFX a été associée à des anomalies du développement liées aux cils ainsi qu’à des phénotypes reproducteurs compatibles avec une biogenèse altérée des cils motiles et des flagelles. En tant que régulateur transcriptionnel en amont de nombreux gènes ciliaires structuraux et de transport, RFX2 est fréquemment étudié dans les voies qui gouvernent la clairance mucociliaire, l’établissement de l’asymétrie gauche-droite et l’expression de gènes pertinents pour la spermatogenèse.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RFX2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RFX2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RFX2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RFX2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RFX2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RFX2 pour l'étude de la signalisation de RFX2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RFX2 essentiels à la fonction de RFX2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RFX2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RFX2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RFX2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RFX2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RFX2 plasmide HDR (h) et le RFX2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RFX2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RFX2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.