Plasmide CRISPR/Cas9 KO REPS1 (m): sc-422650

Présentation

Reps1 (REPS1) code un adaptateur endocytique impliqué dans l’internalisation des récepteurs et le trafic membranaire via des interactions avec des protéines participant à l’endocytose médiée par la clathrine et à la signalisation des petites GTPases. REPS1 contribue au contrôle spatial de la signalisation en régulant le recyclage et la downrégulation des récepteurs activés à la surface cellulaire, influençant des voies qui modèlent la prolifération, l’adhésion et la dynamique du cytosquelette. Dans des systèmes murins, la perturbation de Reps1 est utilisée pour étudier comment le trafic endocytique s’articule avec les réseaux de signalisation dépendants des facteurs de croissance et des intégrines, dans des contextes immunitaires et épithéliaux. La dérégulation du trafic des récepteurs et de l’atténuation des signaux est largement pertinente pour des mécanismes associés aux maladies, notamment la migration cellulaire altérée et une transduction du signal aberrante, faisant de Reps1 un nœud utile pour des études mécanistiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO REPS1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Reps1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Reps1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Reps1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine REPS1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Reps1 pour l'étude de la signalisation de REPS1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Reps1 essentiels à la fonction de REPS1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Reps1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le REPS1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le REPS1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Reps1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le REPS1 plasmide HDR (m) et le REPS1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Reps1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Reps1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.