Rent2 Double Nickase Plasmid (m): sc-435860-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Rent2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Rent2 Double-Nickase-Plasmid (m) und Rent2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Upf2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Rent2: sc-374230
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Rent2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-435860-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rent2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-435860-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Maus-Upf2 (Rent2) kodiert einen essenziellen RNA-Überwachungsfaktor, der für den nonsense-vermittelten mRNA-Abbau (NMD) erforderlich ist – einen Signalweg, der Transkripte mit vorzeitigen Terminationscodons erkennt und abbaut, um die Genauigkeit des Proteoms zu erhalten. RENT2 wirkt zusammen mit zentralen NMD-Komponenten wie UPF1 und UPF3 und koppelt die Translationsbeendigung an das Remodeling von mRNPs, wodurch es die mRNA-Stabilität, Ergebnisse alternativen Spleißens und die stressabhängige Regulation des Transkriptoms beeinflusst. Die Aktivität von Upf2 wirkt sich auf die neuronale Entwicklung, die Immunhomöostase und die Integrität der Keimbahn aus, und eine dysregulierte NMD wurde mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen, einer puffernden Wirkung auf krebsrelevante Transkripte sowie veränderten Antworten auf genotoxischen oder proteotoxischen Stress in Verbindung gebracht. Die experimentelle Störung von Upf2 wird häufig eingesetzt, um RNA-Qualitätskontrolle, translationsbezogene Überwachung und die Robustheit der Genexpression in Säugerzellen zu untersuchen.
Rent2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Upf2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Upf2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Upf2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Upf2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.