REM Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422645

Descripción general

Mouse Rem1 codifica REM, un miembro de la familia RGK de pequeñas proteínas de unión a GTP que modula la excitabilidad de la membrana al regular el tráfico y la compuerta (gating) de los canales de Ca2+ dependientes de voltaje. Mediante interacciones con las subunidades β de los canales y reguladores del citoesqueleto, REM influye en la señalización dependiente de Ca2+, el acoplamiento excitación–contracción y programas transcripcionales dependientes de la actividad. La expresión de Rem1 responde a la estimulación celular y se ha relacionado con el control del crecimiento y la diferenciación celular en tejidos eléctricamente activos, lo que respalda investigaciones en electrofisiología cardíaca, señalización neuronal y función del músculo liso vascular. La señalización RGK desregulada se estudia en el contexto de mecanismos arritmogénicos, neuroadaptación y procesos de remodelado en los que un influjo de Ca2+ alterado afecta a vías posteriores.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO REM (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rem1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rem1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rem1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína REM.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rem1 para la investigación de la señalización de REM, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Rem1 críticos para la función de REM
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rem1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido REM CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido REM CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rem1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR REM (m) y el plásmido HDR REM (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rem1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rem1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.