Partículas Lentivirales de Activación (m) RelB: sc-422643-LAC

Relb codifica RelB, un miembro de la familia NF-κB que funciona principalmente en la vía no canónica de NF-κB mediante la heterodimerización con p52 (NFKB2). RelB regula programas transcripcionales que controlan la maduración de las células dendríticas, la supervivencia de las células B, la organogénesis linfoide y la señalización inflamatoria impulsada por citocinas aguas abajo de receptores como BAFFR, CD40, LTβR y RANK. En modelos murinos, la alteración de la actividad de RelB perturba la homeostasis inmunitaria y se ha vinculado con inflamación crónica, autoinmunidad y la regulación inmunitaria asociada a tumores. Dado que RelB integra señales de desarrollo e inflamatorias, se utiliza ampliamente para estudiar la diferenciación de células inmunitarias, el diálogo cruzado entre estroma e inmunidad y redes transcripcionales de NF-κB dependientes del contexto.

Las partículas de activación lentiviral RelB (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Relb en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral RelB (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Relb, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de RelB. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Relb y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.