RBM7 Double Nickase Plasmid (h): sc-408808-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RBM7 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RBM7 Double-Nickase-Plasmid (h) und RBM7 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RBM7 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RBM7 Double Nickase Plasmid (h) | sc-408808-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RBM7 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-408808-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RBM7 kodiert ein RNA-bindendes Protein, das als Kernbestandteil des Nuclear Exosome Targeting (NEXT)-Komplexes fungiert und die Erkennung von RNA mit der Rekrutierung des RNA-Exosoms zur Degradation kurzlebiger und aberranter nukleärer Transkripte koppelt. Durch die Regulation von Produkten pervasiver Transkription, promoteraufwärts gelegenen Transkripten und nichtkodierenden RNAs trägt RBM7 zur RNA-Qualitätskontrolle, zur transkriptionellen Homöostase und zur Genomintegrität bei. Die RBM7-abhängige RNA-Überwachung überschneidet sich mit Prozessen wie der Transkription durch RNA-Polymerase II, der RNA-Prozessierung und zellulären Stressantworten. Eine fehlregulierte RNA-Metabolisierung und beeinträchtigte nukleäre RNA-Abbauwege, an denen RBM7 beteiligt ist, sind für mechanistische Studien zu Krebs und Neurodegeneration relevant, bei denen Instabilität des Transkriptoms ein häufiges Merkmal ist.
RBM7 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RBM7-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RBM7 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RBM7-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RBM7-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.