Plasmide CRISPR d'Activation (h) RBM7: sc-408808-ACT

Le gène humain **RBM7** code une protéine liant l’ARN qui constitue un composant central du complexe **NEXT** (Nuclear Exosome Targeting). En partenariat avec **ZCCHC8** et **SKIV2L2/MTR4**, RBM7 achemine des ARN nucléaires spécifiques vers l’exosome à ARN afin d’en assurer la maturation et la dégradation. RBM7 reconnaît préférentiellement des éléments riches en U et contribue à la surveillance des ARN en favorisant l’élimination de transcrits situés en amont des promoteurs, des ARN d’enhancers et d’autres ARN non codants à courte durée de vie, modulant ainsi la production transcriptionnelle et maintenant l’homéostasie des ARN nucléaires. En couplant le contrôle qualité des ARN à la transcription et au métabolisme des ARN associés à la chromatine, RBM7 influence la stabilité du génome et des programmes d’expression génique sensibles au stress. Un dérèglement des voies de dégradation des ARN nucléaires impliquant RBM7 a été associé à des modifications des réseaux de régulation génique et présente un intérêt pour l’étude du remodelage transcriptionnel lié au cancer ainsi que des phénotypes neurodéveloppementaux associés à des défauts de maturation des ARN.

RBM7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RBM7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RBM7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RBM7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RBM7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RBM7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RBM7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RBM7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RBM7 dans les cellules tumorales présentant une expression de RBM7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.