Plasmide CRISPR/Cas9 KO RBM15 (h): sc-417289

Présentation

RBM15 (RNA binding motif protein 15) est un régulateur se liant à l’ARN, impliqué dans le contrôle post-transcriptionnel de l’expression génique, notamment l’épissage alternatif, la maturation des ARNm et les décisions de destinée des transcrits qui façonnent l’état cellulaire. Il a été associé à la modification de l’ARN et à la régulation épitranscriptomique via des interactions avec la machinerie liée à la m6A, influençant des programmes du métabolisme de l’ARN pertinents pour l’hématopoïèse et la différenciation. RBM15 est également étudié dans des contextes transcriptionnels et associés à la chromatine, reliant le traitement de l’ARN aux sorties d’expression génique au cours du développement. La dérégulation de RBM15 a été associée à des voies liées aux hémopathies malignes et à une altération de l’engagement de lignée, ce qui en fait une cible utile pour étudier les mécanismes centrés sur l’ARN dans la biologie des maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO RBM15 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RBM15 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RBM15, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RBM15 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine RBM15.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RBM15 pour l'étude de la signalisation de RBM15, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RBM15 essentiels à la fonction de RBM15
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RBM15 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le RBM15 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le RBM15 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RBM15. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le RBM15 plasmide HDR (h) et le RBM15 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RBM15 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RBM15 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.