Plasmide CRISPR d'Activation (h) RasGRP1: sc-402120-ACT

Le gène humain **RASGRP1** code **RasGRP1**, un facteur d’échange de nucléotides guanyliques (GEF) de Ras régulé par le diacylglycérol et le Ca2+, qui relie la signalisation des récepteurs antigéniques à l’activation de Ras/MAPK. En favorisant l’échange GDP→GTP sur Ras, RasGRP1 contribue à coordonner la signalisation en aval via ERK, les programmes transcriptionnels et des décisions cellulaires telles que la prolifération, la différenciation et la survie, en particulier dans les lymphocytes. L’activité de RasGRP1 intègre des signaux issus des seconds messagers produits par la PLCγ et participe au développement et à l’activation des cellules immunitaires. Une expression ou une signalisation de **RASGRP1** dérégulée a été associée à des dysfonctionnements immunitaires et à des phénotypes de signalisation lymphocytaire altérés, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des voies des immunorécepteurs et des réseaux transcriptionnels dépendants de Ras.

RasGRP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de RASGRP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

RasGRP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus RASGRP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription RASGRP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de RasGRP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus RASGRP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de RasGRP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie RasGRP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de RASGRP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.