RASAL1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422603

Descripción general

Rasal1 codifica RASAL1, una proteína activadora de la GTPasa de Ras que acelera la conversión de Ras-GTP activo a Ras-GDP inactivo, limitando así la señalización impulsada por Ras. Al modular la actividad de las vías RAF–MEK–ERK y PI3K–AKT aguas abajo, RASAL1 influye en programas de proliferación, supervivencia y diferenciación celular, incluidos efectos dependientes del contexto sobre fenotipos epiteliales y mesenquimales. La alteración de la función o la expresión de RASAL1 se ha asociado con un control del crecimiento desregulado y con remodelado fibrótico en múltiples tejidos, lo que respalda su relevancia para estudios de la homeostasis de la señalización y de la reprogramación celular asociada a enfermedad en modelos murinos. Estas propiedades hacen de Rasal1 un nodo útil para analizar la retroalimentación de la vía de Ras y su comunicación cruzada con redes reguladoras transcripcionales y de la matriz extracelular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO RASAL1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rasal1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rasal1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rasal1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína RASAL1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rasal1 para la investigación de la señalización de RASAL1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Rasal1 críticos para la función de RASAL1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rasal1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido RASAL1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido RASAL1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rasal1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR RASAL1 (m) y el plásmido HDR RASAL1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rasal1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rasal1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.