Plasmide CRISPR/Cas9 KO Rag A (h): sc-411501

Présentation

RRAGA code Rag A, une petite GTPase apparentée à Ras qui forme des hétérodimères avec RagC/D afin de coupler la disponibilité intracellulaire en acides aminés à l’activation de mTORC1 à la surface des lysosomes. Grâce à un cycle régulé entre les états liés au GDP et au GTP, ainsi qu’à son interaction avec le complexe Ragulator et les régulateurs GATOR, Rag A contrôle la phosphorylation des substrats de mTORC1, coordonnant la synthèse protéique, la suppression de l’autophagie et la reprogrammation métabolique. Une signalisation dérégulée des GTPases Rag et une activité aberrante de mTORC1 sont impliquées en oncologie ainsi que dans des contextes de maladies métaboliques et neurodéveloppementales, faisant de RRAGA un nœud utile pour disséquer les circuits de détection des nutriments. La perturbation génétique de RRAGA permet des études mécanistiques de la signalisation dépendante des lysosomes et des voies en aval de la traduction et de l’autophagie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Rag A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RRAGA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RRAGA, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RRAGA à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Rag A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RRAGA pour l'étude de la signalisation de Rag A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RRAGA essentiels à la fonction de Rag A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RRAGA pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Rag A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Rag A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RRAGA. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Rag A plasmide HDR (h) et le Rag A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RRAGA pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RRAGA définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.