Raf-1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400202-LAC
- alvos específicos: human
- 200 µl de alto titulo de partículas de ativação lentiviral CRISPR/dCas9 prontas para a transdução of transduction-ready
- Raf-1 as Partículas de Ativação Lentiviral (h) agem como um sistema de ativação de transcrição sinergética ao mediador de ativação (SAM, que foi criado para regular positivamente com especificidade e eficiência a expressão genética via transdução celular com lentivirus
- Raf-1 As partículas de ativação lentivirais (h) contem os seguintes elementos de ativação SAM:uma nuclease Cas9 (dCas9) desativada (D10A and N863A) ligadas a um domínio de transactivacao VP64, uma proteína de fusão MS2-p65-HSF1 e um alvo-especifico de RNA guia de 20 nt guia RNA. Ainda, as partículas contem genes de resistência a blasticidina, higromicina e puromicina
- Durante a transdução, o complexo SAM se liga a uma região especifica de aproximadamente 200-250 nt upstream da região de inicia da transcrição e assegura um recrutamento robusto de fatores de transcrição para uma eficiente ativação genética
- Os gRNAs codificados pelo Raf-1 Plasmídeo de Ativação Lentiviral (h) e pelo Raf-1 Plasmídeo de Ativação Lentiviral (h2) têm como alvo regiões reguladoras distintas do promotor RAF1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo: Raf-1 Anticorpo (E-10): sc-7267
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Raf-1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h) | sc-400202-LAC | 200 µl | $455.00 |
O RAF1 humano codifica a Raf-1, uma quinase de serina/treonina que atua como um nó central da via MAPK, conectando GTPases ativadas da família RAS à sinalização de MEK1/2 e ERK1/2. A Raf-1 integra sinais provenientes de receptores tirosina-quinase e de diversas proteínas scaffolding para regular proliferação, diferenciação, sobrevivência e respostas ao estresse, além de desempenhar funções adicionais na dinâmica do citoesqueleto e na sinalização mitocondrial. A atividade desregulada de RAF1 contribui para a saída aberrante de ERK observada em múltiplos contextos de sinalização relacionados ao câncer e também está implicada em fenótipos de RASopatias por meio de hiperativação da via e de sinalização do desenvolvimento alterada. Assim, RAF1 serve como um ponto de entrada mecanístico para estudar o feedback da via, o controle da amplitude e da duração do sinal e a comunicação cruzada com PI3K/AKT e reguladores apoptóticos.
As Partículas de Ativação Lentivirais Raf-1 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de RAF1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.
As Partículas de Ativação Lentivirais Raf-1 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição RAF1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Raf-1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo RAF1 e a arquitetura reguladora.
O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.