Rad54B Double Nickaseプラスミド (h): sc-403794-NIC

RAD54B は、SWI2/SNF2 ファミリーに属する DNA 依存性 ATP アーゼである Rad54B をコードしており、RAD51 と協働して DNA をリモデリングし、二本鎖切断修復における鎖侵入を促進することで、相同組換えに機能します。Rad54B は、DNA 損傷応答シグナル伝達、複製に伴う修復、遺伝毒性ストレスからの回復に関与することでゲノム安定性に寄与し、中核的な相同組換え経路および組換え依存的チェックポイント経路と結び付けられています。RAD54B 活性の変化は、染色体不安定性や変異負荷の増大を引き起こし得るため、腫瘍生物学や DNA 修復不全状態の文脈でしばしば研究対象となります。このように、RAD54B は組換え効率、DNA 損傷因子に対する感受性、そして正確な染色体維持を制御する機構への影響という観点から広く検討されています。

Rad54B ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における RAD54B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、RAD54B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、RAD54Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、RAD54Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。