Rac 2 Double Nickase Plasmid (h): sc-401157-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Rac 2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Rac 2 Double-Nickase-Plasmid (h) und Rac 2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RAC2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Rac 2: sc-293429
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Rac 2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401157-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rac 2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401157-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RAC2 kodiert Rac2, eine in hämatopoetischen Zellen angereicherte kleine GTPase der Rho-Familie, die zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen wechselt, um den Umbau des Aktinzytoskeletts, die Zellpolarität und die gerichtete Migration zu koordinieren. Rac2 integriert Signale nachgeschaltet von Chemokinrezeptoren, Integrinen und Fc-Rezeptoren, um Phagozytose, Degranulation und die Produktion reaktiver Sauerstoffspezies über Signalwege wie die PI3K-Signalkaskade und die Aktivierung der NADPH-Oxidase zu regulieren. In Immunzellen trägt Rac2 zur Leukozytenwanderung, Adhäsion und antimikrobiellen Abwehr bei und verknüpft seine Aktivität mit entzündlichen Signalprogrammen. Eine fehlregulierte RAC2-Funktion oder -Expression ist relevant für Studien zu Immundefizienzen, aberrantem Neutrophilen-/Lymphozytenverhalten und Mechanismen hämatologischer Erkrankungen, bei denen Zytoskelettdynamik und oxidativer Burst gestört sind.
Rac 2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RAC2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RAC2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RAC2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RAC2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.