Partículas Lentivirales de Activación (h) Rab11-FIP5: sc-407779-LAC

RAB11FIP5 codifica Rab11-FIP5, una proteína que interactúa con la familia Rab11 y que actúa como efector en el tráfico de endosomas de reciclaje dependiente de Rab11. Al conectar membranas positivas para Rab11 con la maquinaria de motores y de anclaje (tethering), Rab11-FIP5 ayuda a coordinar la clasificación de la carga, el reciclaje endocítico y la entrega de membrana necesarios para la polaridad, la citocinesis y la renovación de receptores. Estos procesos se integran con redes de transporte vesicular que regulan la intensidad de la señalización y la composición de la membrana, lo que hace de RAB11FIP5 un nodo útil para estudiar la regulación de las vías endosómicas. La desregulación del reciclaje endocítico se ha implicado en diversos fenotipos relevantes para enfermedades, incluidos cambios en la señalización de receptores, migración celular aberrante y alteraciones en la función de células inmunitarias.

Las partículas de activación lentiviral Rab11-FIP5 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de RAB11FIP5 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Rab11-FIP5 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción RAB11FIP5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Rab11-FIP5. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo RAB11FIP5 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.