Rab 7 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-422571-LAC

Rab7 codifica a Rab 7, uma pequena GTPase que regula a maturação de endossomos tardios, o tráfego endossomo–lisossomo e a degradação lisossomal por meio do recrutamento coordenado de complexos efetores envolvidos na ancoragem e fusão de vesículas. Em células de camundongo, a atividade de Rab 7 integra-se às vias de autofagia e de biogênese de lisossomos, influenciando a renovação de cargas, a redução (downregulation) de receptores e a remodelação de membranas. O tráfego dependente de Rab7, quando desregulado, pode perturbar a proteostase e o controle de qualidade de organelas, processos relevantes para a neurodegeneração, a biologia de infecções e o metabolismo de células cancerígenas. Como um nó central na rede endolisossomal, Rab 7 é amplamente utilizada para investigar o fluxo endocítico, a fusão autofagossomo–lisossomo e o tráfego de patógenos intracelulares.

As Partículas de Ativação Lentivirais Rab 7 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Rab7 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais Rab 7 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Rab7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de Rab 7. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Rab7 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.