Rab 5A Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-435445

Descripción general

Rab5a codifica la pequeña GTPasa Rab5A, un regulador central de la dinámica de los endosomas tempranos que coordina la endocitosis mediada por clatrina, el acoplamiento/fusión de vesículas y la maduración endosomal a través de efectores como EEA1 y nodos de señalización de PI3K. Al controlar la internalización y el tráfico de receptores, Rab5A influye en la amplitud y la duración de la señalización aguas abajo de vías como EGFR/MAPK y PI3K/AKT, y contribuye al reciclaje de membrana y a la clasificación de la carga dirigida a la degradación lisosomal. La actividad de Rab5A también se ha vinculado con la remodelación del citoesqueleto y el crecimiento de neuritas mediante la comunicación cruzada entre endosomas y actina. La desregulación del tráfico endocítico en el que participa Rab5a se ha implicado en defectos endosomales asociados a la neurodegeneración, un manejo alterado de receptores inmunitarios y una señalización aberrante de receptores de factores de crecimiento en modelos de enfermedades proliferativas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Rab 5A (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Rab5a en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Rab5a junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Rab5a tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Rab 5A.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Rab5a para la investigación de la señalización de Rab 5A, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Rab5a críticos para la función de Rab 5A
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Rab5a para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Rab 5A CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Rab 5A CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Rab5a. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Rab 5A (m) y el plásmido HDR Rab 5A (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Rab5a para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Rab5a definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.