Rab 2A CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403154-ACT

Das humane RAB2A kodiert die kleine GTPase Rab2A, einen zentralen Regulator des vesikulären Transports vom ER zum Golgi sowie innerhalb des Golgi, der über den Wechsel zwischen GDP- und GTP-gebundenen Zuständen die Frachtsortierung, das Andocken von Vesikeln und Fusionsereignisse koordiniert. Rab2A unterstützt die Homöostase des sekretorischen Weges und trägt zur Organisation von Organellen bei, einschließlich der Golgi-Integrität und der Membrandynamik, die die Proteinverarbeitung und -zustellung beeinflussen. Über seine Funktion im Membrantransport ist RAB2A mit Signalwegen verknüpft, die Proteostase, Rezeptorumsatz und Stressantworten steuern und mit Zellwachstum und -überleben zusammenhängen. Fehlregulierte Rab-GTPase-Signalgebung und Transportprogramme, einschließlich RAB2A-assoziierter Netzwerke, werden häufig im Kontext onkogener Signalgebung, der Neurobiologie sowie von Pathogen–Wirt-Interaktionen untersucht, bei denen die Kapazität des Vesikeltransports krankheitsrelevante Phänotypen prägen kann.

Rab 2A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen RAB2A-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Rab 2A Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des RAB2A-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der RAB2A-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Rab 2A-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native RAB2A-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Rab 2A-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Rab 2A-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem RAB2A-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.