Plasmide CRISPR d'Activation (h) PTPMT1: sc-403905-ACT

PTPMT1 code une phosphatase de tyrosine mitochondriale localisée à la membrane interne de la mitochondrie, où elle régule le métabolisme des phospholipides, en particulier la déphosphorylation du phosphatidylglycérophosphate lors de la biosynthèse de la cardiolipine. En modulant la composition de la cardiolipine, PTPMT1 influence le fonctionnement de la chaîne de transport d’électrons, l’architecture de la membrane mitochondriale et l’homéostasie énergétique, avec des effets en aval sur l’équilibre rédox et la sensibilité à l’apoptose. Une activité altérée de PTPMT1 a été associée à des défauts de respiration mitochondriale et à une reprogrammation métabolique, des processus fréquemment impliqués en biologie du cancer et dans les mécanismes des maladies cardiométaboliques. Par conséquent, PTPMT1 est étudiée dans des voies reliant la signalisation lipidique mitochondriale à la phosphorylation oxydative, à la mitophagie et aux réponses au stress.

PTPMT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PTPMT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PTPMT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PTPMT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PTPMT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PTPMT1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PTPMT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PTPMT1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PTPMT1 dans les cellules tumorales présentant une expression de PTPMT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.