Plasmide CRISPR/Cas9 KO PSPH (h): sc-403897

Présentation

La phosphosérine phosphatase (PSPH) catalyse la dernière étape de la voie de biosynthèse de la sérine phosphorylée, en convertissant l’O‑phospho‑L‑sérine en L‑sérine et en phosphate inorganique. En contrôlant la disponibilité intracellulaire de la sérine, PSPH soutient le métabolisme à un carbone et la synthèse des nucléotides, l’équilibre rédox via la production de glutathion, ainsi que la synthèse des lipides, reliant ainsi le métabolisme des acides aminés aux programmes de prolifération et de réponse au stress. L’activité de PSPH s’inscrit dans la reprogrammation métabolique observée dans les cellules à division rapide et est fréquemment étudiée aux côtés de PHGDH et PSAT1 au sein de l’axe sérine–glycine. Une expression dérégulée de PSPH a été associée à des phénotypes métaboliques altérés dans le cancer et d’autres troubles caractérisés par des perturbations du métabolisme des acides aminés et du métabolisme à un carbone, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des vulnérabilités métaboliques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PSPH (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PSPH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PSPH, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PSPH à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PSPH.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PSPH pour l'étude de la signalisation de PSPH, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PSPH essentiels à la fonction de PSPH
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PSPH pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PSPH plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le PSPH plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PSPH. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PSPH plasmide HDR (h) et le PSPH (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PSPH pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PSPH définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.