Plasmide CRISPR d'Activation (h) PSMD3: sc-405946-ACT

PSMD3 code une sous-unité non ATPasique de la particule régulatrice 19S du protéasome 26S, contribuant à la reconnaissance et au traitement des protéines dépendants de l’ubiquitine avant leur dégradation. En soutenant la fonction du protéasome, PSMD3 influence la protéostasie cellulaire, la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress et les voies de présentation antigénique qui dépendent du renouvellement régulé de protéines clés de signalisation. Une activité du protéasome dérégulée et une expression altérée de PSMD3 ont été associées à une signalisation inflammatoire aberrante et à des programmes oncogéniques dans de multiples contextes, reflétant le rôle central du protéasome dans le contrôle de la stabilité des facteurs de transcription et des protéines de point de contrôle. Par conséquent, PSMD3 constitue une cible utile pour des études mécanistiques de la dynamique du système ubiquitine–protéasome et du remodelage des voies en aval.

PSMD3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PSMD3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PSMD3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PSMD3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PSMD3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PSMD3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PSMD3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PSMD3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PSMD3 dans les cellules tumorales présentant une expression de PSMD3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.