Plasmide Double Nickase (h) PSM: sc-401947-NIC

FOLH1 code l’antigène membranaire spécifique de la prostate (PSMA), une métallopeptidase transmembranaire de type II dotée d’activités folate hydrolase et NAALADase, qui régule la disponibilité du glutamate extracellulaire et le métabolisme des folates. Dans les tissus humains, PSMA contribue au traitement des nutriments et à la signalisation en clivant des folates polyglutamylés et des neuropeptides, ce qui l’associe à la gestion des acides aminés et à la communication métabolique à la surface cellulaire. L’expression et l’activité de FOLH1/PSMA sont couramment étudiées dans des contextes épithéliaux et neuronaux, où des variations peuvent influer sur l’adhérence cellulaire, la migration et la signalisation du microenvironnement. Les dérégulations de la biologie de FOLH1 sont fréquemment examinées en lien avec des programmes oncogéniques et la neurobiologie, ce qui en fait un locus utile pour analyser la fonction des enzymes membranaires et les effets en aval sur les voies de signalisation.

PSM Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus FOLH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de FOLH1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de FOLH1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de FOLH1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.