PSM Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401947-ACT

FOLH1 codifica o antígeno de membrana específico da próstata (PSMA/PSM), uma metalopetidase transmembranar do tipo II com atividade de carboxipeptidase de glutamato, que modula o metabolismo extracelular do folato e a sinalização glutamatérgica. Em tecidos periféricos, o FOLH1 contribui para o processamento de folatos poliglutamatos, sustentando o metabolismo de um carbono e a biossíntese de nucleotídeos, enquanto no sistema nervoso atua como NAALADase para hidrolisar o N-acetilaspartilglutamato e influenciar a disponibilidade sináptica de glutamato. O PSMA também é expresso na neovasculatura associada a tumores e em contextos de linhagem prostática, tornando a regulação de FOLH1 relevante para estudos de programas angiogênicos, reprogramação metabólica e biologia de enzimas de superfície celular em microambientes associados ao câncer. Essas funções conectam o FOLH1 a vias que governam a utilização de nutrientes, o processamento extracelular de peptídeos e mudanças no estado celular dependentes de sinalização.

PSM O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de FOLH1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

PSM O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus FOLH1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição FOLH1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de PSM. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus FOLH1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de PSM no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via PSM em células tumorais com expressão de FOLH1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.