PSGL-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422874

Descripción general

Selplg codifica el ligando 1 de la glucoproteína de P-selectina (PSGL-1), una sialomucina de tipo mucina expresada en leucocitos que se une a las selectinas para mediar el anclaje, el rodamiento y la adhesión firme sobre el endotelio activado y las plaquetas. Mediante glicosilación regulada y sulfatación de tirosinas, PSGL-1 se integra con la señalización de adhesión y la impulsada por quimiocinas para coordinar el tráfico leucocitario, la extravasación y la formación de la sinapsis inmunológica. PSGL-1 participa en cascadas inflamatorias al modular el reclutamiento de neutrófilos, las interacciones monocito-endotelio y los agregados plaqueta–leucocito, vinculando la inflamación vascular con la activación inmunitaria. La función desregulada de SELPLG/PSGL-1 se ha asociado con alteraciones en la defensa del huésped y con patología inflamatoria, lo que lo convierte en un blanco útil para estudios mecanísticos de la migración leucocitaria y de procesos relacionados con la inmunotrombosis.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PSGL-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Selplg en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Selplg junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Selplg tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PSGL-1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Selplg para la investigación de la señalización de PSGL-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Selplg críticos para la función de PSGL-1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Selplg para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PSGL-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PSGL-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Selplg. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PSGL-1 (m) y el plásmido HDR PSGL-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Selplg para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Selplg definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.