Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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PSD-95 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420008
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- PSD-95 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im PSD-95-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PSD-95: sc-32290
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PSD-95 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-420008 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Dlg4 kodiert das postsynaptische Dichteprotein 95 (PSD-95), ein wichtiges MAGUK-Gerüstprotein, das exzitatorische Synapsen organisiert, indem es NMDA- und AMPA-Typ-Glutamatrezeptoren zusammen mit Signalenzymen und Regulatoren des Zytoskeletts in der postsynaptischen Dichte anreichert. PSD-95 koordiniert die synaptische Reifung und Plastizität über Signalwege, die den Rezeptortransport, calciumabhängige Signalübertragung und aktivitätsabhängiges Remodeling dendritischer Dornen steuern. In neurowissenschaftlichen Mausmodellen wird eine veränderte Dlg4-/PSD-95-Funktion häufig genutzt, um Mechanismen zu untersuchen, die der Balance zwischen exzitatorischer und inhibitorischer Aktivität sowie der Verschaltung neuronaler Netzwerke zugrunde liegen, mit Relevanz für neuroentwicklungsbezogene und neuropsychiatrische Phänotypen. Aufgrund seiner zentralen Rolle in der synaptischen Signalübertragung ist es ein häufiges Ziel, um glutamaterge Transmission und Plastizität in vitro und in vivo zu analysieren.
Das PSD-95 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Dlg4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Dlg4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Dlg4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PSD-95-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Dlg4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PSD-95-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Dlg4-Exone abzielen, die für die PSD-95-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Dlg4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom PSD-95 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom PSD-95 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Dlg4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PSD-95 HDR-Plasmid (m) und PSD-95 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Dlg4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Dlg4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.