PSD-95 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400830

Descripción general

DLG4 codifica PSD-95, un andamiaje central de la densidad postsináptica que organiza las sinapsis glutamatérgicas al anclar y agrupar complejos de receptores NMDA y AMPA y acoplarlos a la señalización aguas abajo. A través de sus dominios PDZ, SH3 y GK, PSD-95 coordina el tráfico de receptores sinápticos, la plasticidad dependiente de la actividad y la remodelación del citoesqueleto, integrando vías que regulan la neurotransmisión excitatoria y la maduración de las espinas dendríticas. Las alteraciones de la función y la localización sináptica de DLG4/PSD-95 se han implicado en fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, lo que refleja su papel en la formación de circuitos y el equilibrio excitación–inhibición. Como proteína central (“hub”), PSD-95 se estudia con frecuencia en los mecanismos de aprendizaje y memoria, el escalado sináptico y la proteostasis en las sinapsis neuronales.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PSD-95 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen DLG4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del DLG4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de DLG4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PSD-95.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en DLG4 para la investigación de la señalización de PSD-95, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de DLG4 críticos para la función de PSD-95
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de DLG4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PSD-95 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PSD-95 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus DLG4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PSD-95 (h) y el plásmido HDR PSD-95 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología DLG4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana DLG4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.