Plásmido Doble Nickase (h) PSAP: sc-405857-NIC

El NPEPPS humano codifica la aminopeptidasa sensible a puromicina (PSAP/NPEPPS), una metalpeptidasa citosólica que recorta los péptidos generados por la degradación proteasomal y contribuye al reciclaje de aminoácidos y al recambio de péptidos. La actividad de PSAP se integra con redes de control de calidad proteica, incluido el flujo del sistema ubiquitina–proteasoma y el procesamiento de péptidos que puede influir en la presentación de antígenos y en la señalización de respuesta al estrés. Al regular los intermediarios de degradación y la homeostasis peptídica, NPEPPS se estudia en contextos de desequilibrio de la proteostasis, vulnerabilidad neuronal y remodelación celular relacionada con la inflamación. En la literatura, la desregulación de la actividad aminopeptidasa se ha asociado con vías relevantes para la neurodegeneración y con un manejo alterado de proteínas propensas a la agregación, lo que convierte a NPEPPS en una diana útil para estudios mecanísticos del metabolismo intracelular de péptidos.

PSAP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NPEPPS en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NPEPPS. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NPEPPS. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NPEPPS alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.