Plasmide CRISPR d'Activation (h) PRX VI: sc-401549-ACT

PRDX6 code la peroxyrédoxine VI (PRX VI), une enzyme antioxydante bifonctionnelle dotée d’une activité glutathion peroxydase et d’une activité phospholipase A2 indépendante du calcium, qui contribue à la détoxification du peroxyde d’hydrogène et à la réparation des phospholipides membranaires oxydés. En régulant l’équilibre rédox et le renouvellement des phospholipides, PRX VI influence les réponses cellulaires au stress oxydatif, à la peroxydation lipidique et à la signalisation inflammatoire, en s’inscrivant à l’interface de voies modulant l’apoptose, la protéostasie et la fonction mitochondriale. Des altérations de l’expression de PRDX6 et de l’activité de PRX VI ont été associées à une dérégulation rédox dans la biologie des cancers, les troubles métaboliques et cardiovasculaires, ainsi que les processus neurodégénératifs, où les lésions oxydatives et les dommages membranaires constituent des caractéristiques marquantes.

PRX VI Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRDX6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PRX VI Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRDX6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRDX6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PRX VI. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRDX6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PRX VI au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PRX VI dans les cellules tumorales présentant une expression de PRDX6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.