Plasmide CRISPR d'Activation (h) PRX IV: sc-402821-ACT

La peroxyrédoxine 4 (PRDX4 ; PRX IV) est une peroxydase thiol-dépendante localisée principalement dans le réticulum endoplasmique et la voie de sécrétion, où elle catalyse la réduction du peroxyde d’hydrogène et des hydroperoxydes organiques afin de maintenir l’homéostasie rédox. En couplant la détoxification des peroxydes au repliement oxydatif des protéines, PRX IV s’intègre aux réponses au stress du RE et à la signalisation de la réponse aux protéines mal repliées (UPR), influençant la protéostasie, la sécrétion et la survie cellulaire en conditions oxydatives. Une activité altérée de PRDX4 a été associée à une dérégulation de la signalisation rédox lors de l’inflammation et du stress métabolique, et elle est fréquemment étudiée dans des contextes où le stress oxydatif façonne la biologie tumorale, la fonction des cellules immunitaires et la physiologie des tissus sécrétoires. En tant que régulateur rédox, PRX IV interfère également avec des nœuds de signalisation médiés par les peroxydes qui modulent des voies de kinases et des programmes transcriptionnels liés à l’adaptation cellulaire.

PRX IV Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRDX4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PRX IV Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRDX4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRDX4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PRX IV. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRDX4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PRX IV au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PRX IV dans les cellules tumorales présentant une expression de PRDX4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.