Plasmide Double Nickase (h) PRX III: sc-401730-NIC

PRDX3 code la peroxyrédoxine III (PRX III), une peroxydase mitochondriale dépendante de la thiorédoxine, qui réduit le peroxyde d’hydrogène et les hydroperoxydes organiques afin de maintenir l’homéostasie rédox. En contrôlant les niveaux mitochondriaux d’espèces réactives de l’oxygène (ROS), PRX III influence l’efficacité de la phosphorylation oxydative, la perméabilité mitochondriale et des voies de signalisation sensibles au rédox, notamment l’apoptose et les réseaux de réponse au stress. L’activité de PRDX3 est liée à l’adaptation cellulaire à l’hypoxie et à la reprogrammation métabolique, et des variations d’expression ont été associées à des phénotypes de stress oxydant observés dans divers cancers ainsi que dans des contextes neurodégénératifs et inflammatoires. En tant que nœud antioxydant mitochondrial, PRX III est fréquemment étudiée pour son impact sur la stabilité du génome, la protéostase et la modulation, induite par les ROS, de l’activité des kinases et des facteurs de transcription.

PRX III Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PRDX3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PRDX3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PRDX3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PRDX3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.