Plasmide CRISPR d'Activation (h) PRX III: sc-401730-ACT

PRDX3 code la peroxyrédoxine III humaine (PRX III), une peroxydase mitochondriale dépendante de la thioredoxine qui détoxifie le peroxyde d’hydrogène et les hydroperoxydes lipidiques afin de maintenir l’homéostasie redox. En limitant les espèces réactives de l’oxygène (ROS) mitochondriales, PRX III soutient la phosphorylation oxydative, préserve l’intégrité de la membrane mitochondriale et influence des voies de signalisation sensibles à l’état redox qui modulent le métabolisme, l’apoptose et les réponses inflammatoires. Les altérations de l’expression ou de l’activité de PRDX3 sont fréquemment étudiées dans le contexte de la biologie du stress oxydant, du dysfonctionnement mitochondrial et de l’adaptation redox associée aux mécanismes de cancers, de neurodégénérescence et de maladies cardiométaboliques. En tant que composant clé du réseau antioxydant mitochondrial, PRX III est couramment utilisée pour étudier les changements d’expression génique, de bioénergétique et de voies de réponse au stress induits par les ROS.

PRX III Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRDX3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PRX III Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRDX3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRDX3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PRX III. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRDX3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PRX III au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PRX III dans les cellules tumorales présentant une expression de PRDX3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.