Plasmide CRISPR d'Activation (h) PRX II: sc-401330-ACT

PRDX2 code la peroxyrédoxine-2 humaine (PRX II), une peroxydase cytosolique dépendante des thiols qui réduit le peroxyde d’hydrogène et les hydroperoxydes organiques, contribuant ainsi au maintien de l’homéostasie redox cellulaire. En contrôlant le niveau basal de peroxydes et la signalisation via les thiols, PRX II influence des voies sensibles aux ROS qui régulent la prolifération, l’apoptose et les réponses inflammatoires, notamment par la modulation redox de programmes associés à MAPK, NF-κB et Nrf2. PRX II participe également à la défense antioxydante dans les érythrocytes et dans d’autres contextes soumis à une forte charge oxydative, reliant son activité à des phénotypes de stress oxydatif. Des altérations de l’expression de PRDX2 ou de la fonction de PRX II ont été associées au déséquilibre redox observé dans des modèles de cancer, de neurodégénérescence ainsi que de maladies cardiovasculaires et inflammatoires, ce qui soutient son utilisation dans des études mécanistiques de la signalisation oxydative.

PRX II Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRDX2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PRX II Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRDX2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRDX2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PRX II. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRDX2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PRX II au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PRX II dans les cellules tumorales présentant une expression de PRDX2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.