PRPS2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404095

Descripción general

PRPS2 (fosforribosil pirofosfato sintetasa 2) es una enzima citosólica que cataliza la síntesis de 5‑fosforribosil‑1‑pirofosfato (PRPP), un metabolito clave necesario para la biosíntesis de nucleótidos de purinas y pirimidinas tanto de novo como por la vía de rescate. Al controlar la disponibilidad de PRPP, PRPS2 vincula el flujo de fosfatos de ribosa con la síntesis de ADN/ARN, la señalización dependiente de nucleótidos y la proliferación celular, integrando aportes de la glucólisis y de la vía de las pentosas fosfato. La desregulación del metabolismo de nucleótidos y de la homeostasis de PRPP se asocia con alteraciones en el control del crecimiento y con la reprogramación metabólica observada en múltiples contextos patológicos, incluido el cáncer y trastornos hereditarios de la vía de las purinas. Por ello, PRPS2 se estudia ampliamente en mecanismos de estrés de nucleótidos, dinámica de replicación y vulnerabilidades metabólicas en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PRPS2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PRPS2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PRPS2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PRPS2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PRPS2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PRPS2 para la investigación de la señalización de PRPS2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PRPS2 críticos para la función de PRPS2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PRPS2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PRPS2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PRPS2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PRPS2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PRPS2 (h) y el plásmido HDR PRPS2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PRPS2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PRPS2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.