Plasmide CRISPR/Cas9 KO PRMT7 (m): sc-431946

Présentation

Prmt7 code PRMT7, une méthyltransférase de type III des protéines arginine qui catalyse la diméthylation symétrique de résidus d’arginine sur des substrats histoniques et non histoniques, contribuant ainsi à façonner l’organisation de la chromatine et les programmes transcriptionnels. L’activité de PRMT7 s’inscrit à l’interface de la régulation épigénétique, de la maturation des ARN et de la signalisation d’adaptation au stress, et influence la spécification des lignages ainsi que le maintien de l’identité cellulaire chez les mammifères. Dans des modèles murins, Prmt7 a été associé à la régulation de la fonction des cellules souches musculaires, au développement neuronal et à des réponses transcriptionnelles liées à l’immunité, via la modulation de l’accessibilité de la chromatine et des réseaux d’expression génique. Une méthylation dépendante de PRMT7 dérégulée a été associée à des états de différenciation altérés et à des phénotypes pertinents pour des troubles du développement et des maladies métaboliques, ce qui en fait un point d’entrée utile pour des études mécanistiques du contrôle épigénétique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO PRMT7 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Prmt7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Prmt7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Prmt7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine PRMT7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Prmt7 pour l'étude de la signalisation de PRMT7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Prmt7 essentiels à la fonction de PRMT7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Prmt7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le PRMT7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le PRMT7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Prmt7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le PRMT7 plasmide HDR (m) et le PRMT7 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Prmt7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Prmt7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.