Plasmide CRISPR d'Activation (h) PRMT6: sc-403433-ACT

PRMT6 (protéine arginine méthyltransférase 6) est une PRMT nucléaire de type I qui catalyse la diméthylation asymétrique de résidus d’arginine sur les histones et sur des substrats non histoniques, modulant ainsi la structure de la chromatine et les programmes transcriptionnels. Elle contribue à la régulation épigénétique via la méthylation de l’arginine de l’histone H3 et par un dialogue avec d’autres modifications post-traductionnelles, influençant la progression du cycle cellulaire, les réponses aux dommages de l’ADN et l’expression de gènes associés à la différenciation. L’activité de PRMT6 s’inscrit à l’interface de voies contrôlant la répression/activation transcriptionnelle et de complexes de remodelage de la chromatine, façonnant des réseaux de régulation génique spécifiques du contexte. Une expression ou une activité dérégulée de PRMT6 a été rapportée dans plusieurs contextes pertinents pour les maladies, ce qui étaye son intérêt comme cible pour des études mécanistiques du contrôle épigénétique et de la plasticité de l’expression génique dans les cellules humaines.

PRMT6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRMT6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PRMT6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRMT6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRMT6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PRMT6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRMT6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PRMT6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PRMT6 dans les cellules tumorales présentant une expression de PRMT6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.