Plasmide Double Nickase (h) PRMT5: sc-401115-NIC

PRMT5 code la protéine arginine méthyltransférase 5, une méthyltransférase majeure de type II qui catalyse la diméthylation symétrique de résidus d’arginine sur les histones (p. ex. H4R3 et H3R8) ainsi que sur de nombreux substrats non histoniques. Par ces marques de méthylation, PRMT5 contribue à coordonner l’état de la chromatine, les programmes transcriptionnels et le métabolisme de l’ARN, notamment la biogenèse des snRNP et l’épissage du pré‑ARNm via la méthylation des protéines Sm. L’activité de PRMT5 s’intègre à la régulation épigénétique et au contrôle du cycle cellulaire, influençant la prolifération, la différenciation et les voies de réponse au stress. Une dysrégulation de la fonction de PRMT5 a été associée à des altérations de l’épissage et à des signatures de répression transcriptionnelle observées dans de multiples contextes pertinents pour la maladie, ce qui en fait une cible largement étudiée du contrôle de l’expression génique.

PRMT5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PRMT5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PRMT5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PRMT5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PRMT5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.