Prestin Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401428-ACT

SLC26A5 codifica a prestina, uma proteína motora ligada à membrana, semelhante a um transportador de ânions, altamente enriquecida nas células ciliadas externas da cóclea, que converte alterações no potencial de membrana em eletromotilidade rápida. Essa transdução eletromecânica sustenta a amplificação coclear e a afinação seletiva de frequências, integrando a homeostase iônica com ciclos conformacionais dependentes de voltagem na membrana plasmática. A atividade da prestina está ligada a processos epiteliais de transporte de íons e à mecânica especializada do citoesqueleto e da membrana necessária para a função auditiva. Alterações na expressão ou na função de SLC26A5 estão associadas a fenótipos de perda auditiva neurossensorial e são usadas como um ponto de entrada molecular para estudar a biomecânica das células ciliadas e a desregulação das vias auditivas.

Prestin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC26A5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Prestin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC26A5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC26A5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Prestin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC26A5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Prestin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Prestin em células tumorais com expressão de SLC26A5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.