Plasmide Double Nickase (h) PRDM9: sc-412740-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) PRDM9 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide PRDM9 Double Nickase (h) et le plasmide PRDM9 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PRDM9. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) PRDM9 | sc-412740-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) PRDM9 | sc-412740-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRDM9 code une méthyltransférase de lysine des histones spécifique de la méiose, ainsi qu’un facteur de liaison à l’ADN, qui détermine l’emplacement des points chauds de recombinaison en reconnaissant des motifs de séquence et en déposant les marques H3K4me3 et H3K36me3. Grâce à ses domaines KRAB, PR/SET et à doigts de zinc, PRDM9 coordonne le remodelage de la chromatine et le recrutement de la machinerie de recombinaison méiotique afin d’initier la formation programmée de cassures double brin et d’assurer un appariement correct des chromosomes homologues. La variation des réseaux de doigts de zinc de PRDM9 constitue un déterminant majeur de l’utilisation des points chauds et de la distribution des crossing-over, reliant la fonction de PRDM9 à la stabilité du génome et à la biologie de la reproduction. Une activité PRDM9 dérégulée ou une expression ectopique ont également été étudiées dans le contexte d’anomalies des profils épigénétiques et de réarrangements génomiques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des processus mutationnels et de l’intégrité de la lignée germinale.
PRDM9 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PRDM9 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PRDM9. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PRDM9. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PRDM9.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.