PRAP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423619

Descripción general

La proteína ácida rica en prolina 1 (PRAP1), codificada por el gen murino *Prap1*, es un factor asociado al epitelio, enriquecido en tejidos gastrointestinales y vinculado a las respuestas celulares al estrés luminal. La expresión de PRAP1 está regulada por señales inflamatorias y de factores de crecimiento, incluidas vías aguas abajo de STAT y redes de receptores nucleares que moldean la función de la barrera mucosa. Entre las funciones descritas se incluyen la modulación de programas de supervivencia, diferenciación y regeneración epitelial durante la lesión tisular y la reparación. La desregulación de PRAP1 se ha asociado con alteraciones de la homeostasis intestinal y con contextos de enfermedad relacionados con la inflamación, lo que la hace útil para estudiar mecanismos que conectan la adaptación del epitelio al estrés con la integridad de la barrera.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PRAP1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Prap1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Prap1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Prap1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PRAP1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Prap1 para la investigación de la señalización de PRAP1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Prap1 críticos para la función de PRAP1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Prap1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PRAP1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido PRAP1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Prap1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PRAP1 (m) y el plásmido HDR PRAP1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Prap1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Prap1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.