PPP2R3A Double Nickase Plasmid (h): sc-402433-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PPP2R3A Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PPP2R3A Double-Nickase-Plasmid (h) und PPP2R3A Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PPP2R3A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PPP2R3A Double Nickase Plasmid (h) | sc-402433-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PPP2R3A Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402433-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPP2R3A kodiert PR130, eine regulatorische B″-Untereinheit der Proteinphosphatase 2A (PP2A), die die Assemblierung des PP2A-Holoenzyms, dessen subzelluläre Lokalisation und die Auswahl von Substraten mitsteuert. Über die PP2A-vermittelte Dephosphorylierung beeinflusst PPP2R3A die phosphorylierungsabhängige Kontrolle des Zellzyklusfortschritts, die Organisation des Zytoskeletts sowie Signaltransduktionskaskaden, die kinasegetriebene Signaleingänge integrieren. Eine veränderte PP2A-Regulation wird allgemein mit gestörter Wachstums- und Stressantwort-Signalgebung in Verbindung gebracht, und Änderungen der PPP2R3A-Expression oder -Funktion wurden im Zusammenhang mit der Umverdrahtung onkogener Signalwege und anderen, auf Phosphorylierung zentrierten Krankheitsmechanismen untersucht. Daher wird PPP2R3A häufig erforscht, um zu klären, wie die Spezifität von PP2A nachgeschaltete Signalweg-Outputs und zelluläre Phänotypen bestimmt.
PPP2R3A Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PPP2R3A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PPP2R3A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PPP2R3A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PPP2R3A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.