PPP1R6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406901

Descripción general

PPP1R3D codifica la subunidad reguladora PPP1R6, un adaptador dirigido al glucógeno que orienta a la fosfatasa proteica 1 (PP1) hacia sustratos implicados en el almacenamiento de carbohidratos y la homeostasis energética. Al modular la localización de PP1 y su acceso catalítico, PPP1R6 puede influir en el estado de fosforilación de enzimas del metabolismo del glucógeno y, con ello, determinar la síntesis y la movilización de glucógeno en células humanas. Este nodo regulador se cruza con redes de detección de nutrientes y de señalización de quinasas/fosfatasas que coordinan el flujo metabólico, las condiciones de crecimiento celular y las respuestas al estrés. Las alteraciones en el manejo del glucógeno y en la señalización de fosfatasas son rasgos recurrentes de patologías metabólicas y proliferativas, lo que convierte a PPP1R6 en un punto de entrada útil para estudios mecanísticos de la fosforregulación en contextos relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO PPP1R6 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PPP1R3D en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PPP1R3D junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PPP1R3D tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PPP1R6.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PPP1R3D para la investigación de la señalización de PPP1R6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PPP1R3D críticos para la función de PPP1R6
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PPP1R3D para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido PPP1R6 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PPP1R6 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PPP1R3D. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PPP1R6 (h) y el plásmido HDR PPP1R6 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PPP1R3D para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PPP1R3D definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.