Particules Lentivirales d'Activation (m) PPARγ: sc-422363-LAC

Le gène murin *Pparg* code le récepteur activé par les proliférateurs de peroxysomes gamma (PPARγ), un récepteur nucléaire activé par un ligand qui agit comme facteur de transcription et régule la différenciation des adipocytes, le stockage des lipides et le métabolisme du glucose sensible à l’insuline. PPARγ forme un hétérodimère avec RXR et se fixe sur les éléments de réponse à PPAR afin de coordonner des programmes géniques impliqués dans l’absorption des acides gras, la synthèse des triglycérides et la signalisation des adipokines. Ce régulateur intègre des signaux nutritionnels et inflammatoires, reliant l’homéostasie métabolique à la modulation immunitaire via un dialogue avec des voies telles que NF-κB et MAPK. Une activité dérégulée de *Pparg* est largement étudiée dans la dysfonction métabolique associée à l’obésité, les phénotypes de stéatose hépatique, la polarisation des macrophages et le remodelage lié à la fibrose dans de multiples tissus.

Les particules d'activation lentivirales PPARγ (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Pparg dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PPARγ (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Pparg, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PPARγ. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Pparg ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.