Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
PP1γ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401476
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- PP1γ El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico PP1γ, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PP1γ Anticuerpo (E-4): sc-515943
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
PP1γ Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401476 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
PPP1CC codifica la proteína fosfatasa 1 gamma (PP1γ), una fosfatasa catalítica de serina/treonina que se asocia con diversas subunidades reguladoras para desfosforilar sustratos clave y controlar la especificidad y la localización de sus sustratos. PP1γ contribuye a importantes redes de señalización y control del ciclo celular al regular estados de fosforilación implicados en la progresión mitótica, la segregación cromosómica y la dinámica del citoesqueleto, y también se ha implicado en el procesamiento de ARN y en las respuestas al estrés celular. A través de estas funciones, PP1γ influye en vías que gobiernan la proliferación, la diferenciación y la estabilidad del genoma, lo que convierte a PPP1CC en un nodo relevante para estudiar circuitos reguladores impulsados por la fosforilación. La actividad de PP1 desregulada se ha asociado con señalización oncogénica, mecanismos relacionados con la neurobiología y otros procesos patológicos dependientes de la fosforilación, lo que respalda investigaciones mecanísticas en modelos celulares humanos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO PP1γ (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PPP1CC en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PPP1CC junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PPP1CC tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína PP1γ.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PPP1CC para la investigación de la señalización de PP1γ, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de PPP1CC críticos para la función de PP1γ
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PPP1CC para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido PP1γ CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido PP1γ CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PPP1CC. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR PP1γ (h) y el plásmido HDR PP1γ (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PPP1CC para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PPP1CC definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.