Plasmide CRISPR/Cas9 KO Podocin (h): sc-400930

Présentation

NPHS2 code la podocine, une protéine essentielle du diaphragme de fente des podocytes humains, qui sert d’échafaudage à des complexes de signalisation au niveau de la barrière de filtration glomérulaire. La podocine interagit avec la néphrine et CD2AP et contribue à l’organisation de microdomaines de radeaux lipidiques, soutenant la dynamique du cytosquelette, la mécanoperception et le maintien de l’architecture des prolongements pédicellaires. La perturbation de NPHS2 altère l’intégrité du diaphragme de fente et modifie les voies de signalisation des podocytes liées au remodelage de l’actine et à la survie cellulaire. Les anomalies génétiques et fonctionnelles de la podocine sont fortement associées aux néphropathies protéinuriques, notamment le syndrome néphrotique cortico-résistant et la glomérulosclérose segmentaire et focale, faisant de NPHS2 une cible majeure pour modéliser la dysfonction de la barrière glomérulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Podocin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NPHS2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NPHS2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NPHS2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Podocin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NPHS2 pour l'étude de la signalisation de Podocin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NPHS2 essentiels à la fonction de Podocin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NPHS2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Podocin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Podocin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NPHS2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Podocin plasmide HDR (h) et le Podocin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NPHS2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NPHS2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.