PMPCA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406691

Übersicht

PMPCA kodiert die Alpha-Untereinheit der mitochondrialen Prozessierungspeptidase (MPP), einer heterodimeren Metalloprotease, die nach dem Import in die mitochondriale Matrix die N‑terminalen mitochondrialen Targeting-Präsequenzen von nukleär kodierten Proteinen abspaltet. Über diesen Reifungsschritt unterstützt PMPCA den Zusammenbau und die Funktion der oxidativen Phosphorylierungskomplexe, die mitochondriale Proteostase sowie umfassendere, mit der mitochondrialen Biogenese verknüpfte Programme des Energiestoffwechsels. Eine Störung der PMPCA-Aktivität kann die Reifung mitochondrialer Proteine beeinträchtigen, die Leistungsfähigkeit der Atmungskette verändern und zelluläre Stressantworten auslösen, die sich mit Apoptose und metabolischer Reprogrammierung überschneiden. Varianten in PMPCA wurden mit mitochondrialen Erkrankungen in Verbindung gebracht, die neuroentwicklungsbezogene und neurodegenerative Phänotypen aufweisen, was PMPCA für mechanistische Studien zur mitochondrialen Dysfunktion relevant macht.

Das PMPCA CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PMPCA-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PMPCA-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PMPCA nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PMPCA-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PMPCA-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PMPCA-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf PMPCA-Exone abzielen, die für die PMPCA-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere PMPCA-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom PMPCA CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PMPCA CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PMPCA-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PMPCA HDR-Plasmid (h) und PMPCA HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PMPCA-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PMPCA-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.