Plásmido Doble Nickase (h) PMCA1: sc-402691-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)PMCA1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa PMCA1 (h) y el plásmido de doble nickasa PMCA1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ATP2B1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: PMCA1 Anticuerpo (F-10): sc-398413
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) PMCA1 | sc-402691-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) PMCA1 | sc-402691-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP2B1 codifica la ATPasa transportadora de Ca2+ 1 de la membrana plasmática (PMCA1), una bomba de eflujo de Ca2+ de alta afinidad que mantiene bajos los niveles de calcio citosólico y modula la dinámica de la señalización dependiente de calcio. PMCA1 acopla la hidrólisis de ATP a la extrusión de Ca2+, sustentando procesos como la excitabilidad, la secreción, la progresión del ciclo celular y la transcripción dependiente de calcio a través de vías vinculadas a la calmodulina, la calcineurina/NFAT y la señalización por CaMK. Al regular microdominios locales de Ca2+ en la membrana plasmática, PMCA1 influye en la función endotelial y del músculo liso, la homeostasis neuronal y la integridad de las barreras. La alteración genética y funcional de ATP2B1 se ha asociado con fenotipos cardiovasculares y neurovasculares, incluidos la regulación de la presión arterial y defectos en el manejo del calcio, relevantes para el modelado mecanístico de enfermedades en células humanas.
PMCA1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ATP2B1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ATP2B1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ATP2B1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ATP2B1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.